Small:通过局部电穿孔对活细胞中的酶进行瞬时取样,并通过SAMDI质谱对活性进行定量
先知报道 先知报道 2020-05-27

测量少量细胞的酶活性随时间的变化仍然是一个重大的技术挑战。有鉴于此,美国西北大学的Milan Mrksich、Horacio D. Espinosa等研究人员,介绍了一种对细胞细胞质取样的方法,以提取酶并在多个时间点测量它们的活性。

 

本文要点

1设计了一种称为活细胞分析装置(LCAD)的微流控装置,将细胞培养在含有纳米通道的聚合物膜上的微孔阵列中。

2细胞的局部电穿孔在细胞膜与纳米通道的界面处打开了短暂的孔,从而能够将酶提取到纳升体积的腔室中。

3在提取室中,酶修饰固定化的底物,其活性通过自组装单层进行定量,用于基质辅助激光解吸/电离(SAMDI)质谱分析。

4利用LCAD-SAMDI平台,证明了蛋白质向细胞的传递。接下来,研究表明,酶可以被提取,并且它们的活性可以在不损失活力的情况下进行测量。

5最后,在多个时间点采集细胞样本,研究过氧化氢氧化后磷酸酶活性的变化。

有了这种独特的采样设备和无标签的分析格式,带有SAMDI的LCAD为监测小细胞群的细胞活动动力学提供了一种新方法。

 

                                             

 

参考文献:

Prithvijit Mukherjee, et al. Temporal Sampling of Enzymes from Live Cells by Localized Electroporation and Quantification of Activity by SAMDI Mass Spectrometry. Small, 2020.

DOI:10.1002/smll.202000584

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/smll.202000584


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