追踪活细胞内RNA而不干扰其自然相互作用和功能的方法在生物学中至关重要，尤其是其能有助于治疗性RNA递送的研究。在此，瑞典查尔姆斯理工大学L. Marcus Wilhelmsson、Elin K. Esbjörner等人提出了一种隐形标记方法，通过酶法结合荧光三环胞嘧啶类似物tC^O的三磷酸酯，可以高效、高保真地生成RNA转录本。

本文要点：

1） 通过将tC^O掺入组蛋白H₂B与GFP（H₂B:GFP）融合的1.2kb mRNA的高达100%的天然胞嘧啶位置证明了这一点。这种mRNA的光谱特征表明tC^O的掺入率类似于胞嘧啶，这允许有效的标记和针对不同应用的标记比率的控制调节。

2） 利用活细胞共聚焦显微镜和流式细胞术，研究发现tC^O标记的mRNA在人类细胞内有效翻译成H₂B:GFP。这不仅证明了荧光碱基类似物标记核酸在活细胞显微镜中的应用，而且，重要的是，还证明了产生的转录本被翻译成正确的蛋白质。

3） 此外，转录产物及其翻译产物的光谱特性允许其在活细胞中直接、同时可视化。

4） 最后，研究还发现化学转染的tC^O标记的RNA不同于最先进的荧光标记RNA，它能产生与其天然对应物相似数量的蛋白质表达，因此代表了一种研究天然，无干扰加工的方法用于RNA治疗和疫苗的mRNA的表达。

Tom Baladi, et al. Stealth Fluorescence Labeling for Live Microscopy Imaging of mRNA Delivery. J. Am. Chem. Soc., 2021.

DOI: 10.1021/jacs.1c00014

https://doi.org/10.1021/jacs.1c00014