荧光生物传感器为研究活细胞内蛋白质的行为提供了一个有价值的窗口,但它们的局限性越来越明显。有鉴于此,美国北卡罗来纳大学的Klaus M. Hahn、Timothy C. Elston等研究人员,通过基于肽暴露的生物传感器显示活细胞中的单分子构象。
本文要点
1)研究人员报道了一种研究活细胞内单颗粒追踪(SPT)期间单个蛋白质构象的方法。"粘合剂/标签"是基于将一个7-mer的肽(标签)纳入一个蛋白质,其溶剂暴露由蛋白质的构象控制。
2)只有在暴露后,肽才能与报告蛋白(结合剂)发生特异性的相互作用。因此,简单的荧光定位反映了蛋白质的构象。
3)通过直接激发明亮的染料,可以跟踪单个蛋白质的运动轨迹和构象。简单的蛋白质工程提供了适用于SPT和FRET的高度特异性生物传感器。
4)研究人员描述了tagSrc、tagFyn、tagSyk、tagFAK,以及一个正交的粘合剂/标签对。SPT显示了在Src簇内缓慢扩散的活化Src岛和粘附中的活化动态。定量分析和随机建模揭示了体内Src的动力学。
本文研究表明,粘合剂/标签的简单性可以提供对不同蛋白质的研究。
参考文献:
Bei Liu. Biosensors based on peptide exposure show single molecule conformations in live cells. Cell, 2021.
DOI:10.1016/j.cell.2021.09.026
https://www.cell.com/cell/fulltext/S0092-8674(21)01109-0