对活细胞中的核酸进行化学修饰往往会受到染色质中紧密排列的生物正交官能团的影响。为了解决这一问题,麦吉尔大学Nathan W. Luedtke设计了一种双增强策略,即使用一种能够与含有5-乙烯基-2 -脱氧尿苷(VdU)的DNA或含有5-乙烯基-尿苷(VU)的RNA进行反电子需求的Diels-Alder(IEDDA)反应的荧光嵌入剂以用于核酸模板反应。
本文要点:
(1)新型吖啶-四嗪偶联物PINK(KD= 5±1 μM)的可逆高亲和嵌入使得四嗪-烯烃IEDDA在双链DNA上的反应速率比非模板化反应提高了60000倍(590 M-1s-1)。
(2)同时,四嗪-吖啶荧光猝灭的损失使得该反应具有很高的荧光性,其在免洗条件下也可以被检测到。综上所述,这一新型策略能够对分裂细胞中吖啶修饰的核酸进行活细胞动态成像。
Morten O. Loehr. et al. A Kinetic and Fluorogenic Enhancement Strategy for Labeling of Nucleic Acids. Angewandte Chemie International Edition. 2022
DOI: 10.1002/anie.202112931
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/anie.202112931