大片段DNA靶向插入在治疗遗传疾病方面具有巨大的潜力。“先导编辑”可以有效插入短片段(约44 bp)，但不能插入大片段。有鉴于此，武汉大学中南医院的Hao Yin等研究人员，开发出了不依赖DNA供体的高效靶向插入大片段DNA的新方法。

本文要点

1）研究人员开发了GRAND 编辑法，可以在没有DNA供体的情况下精确插入大片段DNA。

2）在“先导编辑”中，需要逆转录模板与靶标序列杂交，而GRAND 编辑使用一对“先导编辑”的向导RNA，逆转录模板与靶标位点不同源但是两条逆转录模板间彼此互补。

3）用该策略插入150 bp的片段，效率高达63%，只有很少的副产物，对于250 bp的片段，插入效率也有28.4%。尽管目前对于大于400 bp的片段，插入效率较低，但是最长允许的插入片段也能达到1 kb左右。

本文研究确认了GRAND 编辑方法能在多个细胞系和非分裂细胞的多个基因组位点上实现有效插入，这扩大了基因组编辑的范围，使大片段DNA的无供体插入成为可能。

参考文献：

Jinlin Wang, et al. Efficient targeted insertion of large DNA fragments without DNA donors. Nature Methods, 2022.

DOI：10.1038/s41592-022-01399-1

https://www.nature.com/articles/s41592-022-01399-1