化学交联可以快速识别RNA-蛋白质和RNA-核酸分子间或分子内的相互作用。然而,目前还没有方法可以在RNA中特异性、共价地交联连接两个自定义的位点。加州大学圣地亚哥分校Neal K. Devaraj开发了RNA-CLAMP,它能够在RNA中对两个选择的鸟嘌呤残基进行具有位点特异性的酶促交联。
本文要点:
(1)分子内紧压会破坏正常的RNA功能。当交联剂发生光裂解后,活性会得以恢复。实验使用RNA-CLAMP通过光裂解交联器将CRISPR-Cas9基因编辑系统的单导RNA (sgRNA)中的两个茎环夹住,以完全抑制其基因编辑能力。
(2)当利用可见光照射可裂解的交联器后,该系统所具有的高时空分辨率的基因编辑性能会恢复。研究发现,设计两种响应不同波长光的光裂解连接器可以在哺乳动物细胞中实现多重光激活的基因编辑。实验结果表明,这种光激活CRISPR-Cas9基因编辑平台的背景活性极低,且能够选择激活波长,具有多路复用功能。
Dongyang Zhang. et al. Site-Specific and Enzymatic Cross-Linking of sgRNA Enables Wavelength-Selectable Photoactivated Control of CRISPR Gene Editing. Journal of the American Chemical Society. 2022
DOI: 10.1021/jacs.1c12166
https://pubs.acs.org/doi/10.1021/jacs.1c12166