基于聚集的规则间隔短回文重复序列 (CRISPR) 的核酸检测可以与重组酶辅助扩增 (RAA) 相结合，以实现对 SARS-CoV-2 的快速、准确和早期检测。当前基于 CRISPR 的病毒核酸检测方法通常需要大量的手动操作来转移重组酶聚合酶扩增(RPA) 以进行 CRISPR 检测，或者由于将竞争的 RPA 扩增和 CRISPR 检测混合在一起而导致灵敏度受损。基于此，南方科技大学附属第二医院Jiuxin Qu及南方科技大学Xingyu Jiang等人开发了双 CRISPR/Cas12a 辅助 RT-RAA 检测和“样本到答案”离心微流体平台，用于直接、自动化、超灵敏和快速检测 SARS-CoV-2。

本文要点：

（1）作者引入两个crRNA用来同时激活靶DNA上的两个匹配位点，有效提高CRISPR/Cas12a检测的灵敏度，并缩短检测时间。通过靶向 SARS-CoV-2 的 E 基因，双 CRISPR/Cas 辅助 RT-RAA 检测方法可以检测 1 copy/μL 的 SARS-CoV-2 纯化全长 RNA 提取物。

（2）在微流控分析平台中，RT-RAA 扩增和 CRISPR/Cas12a 检测在不同的腔室中进行，因此它们完全不会相互干扰。此外，微流控平台可以通过调节转速自动完成封闭芯片内的流体转移，消除了人工操作和扩增子转移带来的污染。 RT-RAA和CRISPR/Cas12a试剂分别通过冷冻干燥预装到扩增室和检测室中，进一步简化检测过程，操作者只需将核酸样本导入芯片即可。其余核酸扩增、检测、数据读出过程可在30分钟内自动完成。

（3）作为实际应用，通过RT-PCR 测试确认的26 个阳性和 8 个阴性SARS-CoV-2临床样本在自动化离心微流控平台也以 100% 的准确率再次确认。这种即时检测具有一步到位、自动化、快速、灵敏等优点，在临床诊断和疾病预防方面将具有巨大潜力。

参考文献：

Yong Chen, Nan Zong, Feidi Ye, Yixin Mei, Jiuxin Qu, and Xingyu Jiang. Dual-CRISPR/Cas12a-Assisted RT-RAA for Ultrasensitive SARS-CoV-2 Detection on Automated Centrifugal Microfluidics. Anal. Chem. 2022

DOI:10.1021/acs.analchem.2c00638

https://doi.org/10.1021/acs.analchem.2c00638