荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization，FISH)是一种被广泛应用于检测细胞内核酸的技术。然而，由于存在荧光强度较低和背景自发荧光等问题，因此其检测低拷贝核酸的有效性仍会受到很大的限制。有鉴于此，悉尼科技大学金大勇院士和Le Zhang设计了一种具有高灵敏度的镧系配合物增强的生物正交支化DNA扩增(LEBODA)方法，并将其用于在单细胞中进行原位核酸检测。

本文要点：

（1）该方法利用了两个级别的信号放大。首先，它利用点击化学将大量的桥接探针与靶点识别探针进行直接连接，以实现信号强度的初始提升。其次，它将高密度的镧系配合物整合到每个桥接探针中，以实现二次放大。研究发现，与RNAscope方法中使用的传统“double Z”探针相比，LEBODA可通过点击化学方法实现RNA检测信号的单次增强（4倍）。

（2）研究者利用SARS-CoV-2假病毒感染的HeLa细胞证明了LEBODA在感染率低至20%的罕见人群中能够有效实现对病毒感染细胞的检测。实验结果表明，LEBODA方法适用于DNA-FISH和单分子RNA-FISH以及其它基于杂交的信号放大方法。综上所述，该研究设计的LEBODA方法在生物分子敏感检测方面具有重要的应用潜力。

Fang Zhao. et al. Lanthanide-Complex-Enhanced Bioorthogonal Branched DNA Amplification. Analytical Chemistry. 2024

DOI: 10.1021/acs.analchem.3c04274

https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.3c04274