体积超分辨率显微镜通常通过改变点扩散函数(PSF)的形状作为深度的函数,将单分子荧光的3D位置编码为2D图像。然而,所产生的大而复杂的PSF空间足迹需要要求较低的标记密度来避免重叠的荧光信号,从而降低了生物吞吐量和适用性。鉴于此,来自剑桥大学的Steven F. Lee通过将单分子光场显微镜(SMLFM)的密度依赖性与其他3D PSFs(散光、双螺旋和四极)进行定量比较研究现,与双螺旋PSF相比,SMLFM通过视差分辨重叠的发射器,实现了一个数量级的速度提高。
文章要点:
1) 该研究证实,通过全细胞(无扫描)成像和追踪活原代B细胞中的单个膜蛋白,这种光学稳定性,具有高精度(> 99.2±0.1%,0.1 los μm−2)和灵敏度(> 86.6±0.9%,0.1 los μm−2);
2) 此外,研究还发现了高密度体积成像(0.15 los μm−2)在密集的细胞质微管蛋白数据集。
参考资料:
Daly, S., Ferreira Fernandes, J., Bruggeman, E. et al. High-density volumetric super-resolution microscopy. Nat. Commun. (2024).
10.1038/s41467-024-45828-5
https://doi.org/10.1038/s41467-024-45828-5