细胞的生存、生长和分化在很大程度上都依赖于对外源营养的摄取。然而,如何在单细胞水平上量化细胞对小分子营养物质的摄取仍是一项严峻的挑战。有鉴于此,莱顿大学Sander I. van Kasteren基于逆电子需求的Diels Alder(IEDDA)化学设计了一种新的方法,并将其用于研究单细胞的营养摄取。
本文要点:
(1)实验利用四嗪对二乙酸-N-琥珀酰亚胺酯羰基荧光素(CFSE)进行了修饰。CFSE是一种淬灭的荧光基团,可以与蛋白质发生共价反应,并且仅会在胞质中被酯酶作用后发生激活。研究发现,四嗪可作为荧光团的第二淬灭剂。
(2)在IEDDA反应中,当与由富电子或应变亲二烯体修饰的营养物质反应时,该淬灭基团会被破坏,从而使探针发出荧光。实验结果表明,研究者能够通过使用流式细胞术和细胞显微镜监测活的原代免疫细胞群对多种含亲双烯体的营养素的摄取情况。
Yixuan Wang. et al. A Bioorthogonal Dual Fluorogenic Probe for the Live-Cell Monitoring of Nutrient Uptake by Mammalian Cells. Angewandte Chemie International Edition. 2024
DOI: 10.1002/anie.202401733
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/anie.202401733